Wprowadzenie do problematyki ofloksacyny
Ofloksacyna (OFL) to antybiotyk z grupy chinolonów, który posiada szerokie spektrum działania przeciwbakteryjnego. Jest powszechnie stosowany w leczeniu infekcji dróg oddechowych, infekcji układu moczowego oraz innych zakażeń wywołanych przez wrażliwe bakterie. W przemyśle hodowlanym ofloksacyna jest używana do zapobiegania chorobom zwierząt, co jednak rodzi poważne obawy dotyczące pozostałości tego leku w produktach żywnościowych pochodzenia zwierzęcego. Długotrwałe spożywanie takich produktów przez ludzi może prowadzić do rozwoju oporności na leki oraz powodować różne skutki uboczne, w tym toksyczność układu nerwowego i reakcje alergiczne. W 2015 roku w Chinach wprowadzono zakaz obecności ofloksacyny w żywności, jednak przypadki przekroczenia dozwolonych limitów wciąż się zdarzają. Dlatego też istnieje pilna potrzeba opracowania skutecznych metod detekcji pozostałości ofloksacyny w żywności.
Opracowanie nowej metody detekcji ofloksacyny
W badaniach przedstawionych w artykule skoncentrowano się na opracowaniu monoklonalnych przeciwciał o wysokiej czułości i powinowactwie do ofloksacyny. W tym celu zsyntetyzowano hapten ofloksacyny oraz odpowiedni antygen. Ustalono, że IC50 w teście ELISA wynosi 0,13 ng/mL, a limit detekcji to 0,033 ng/mL. W przypadku testu immunochromatograficznego na złocie koloidalnym, wizualny limit detekcji wynosi 1 ng/g. Opracowana metoda jest szybka i skuteczna, co czyni ją odpowiednią do zastosowań w warunkach terenowych.
Wyniki badań nad nową metodą
Identyfikacja semi-antygenu ofloksacyny
Badania wykazały, że zmodyfikowany hapten ofloksacyny posiada charakterystyczne piksy masowe, co potwierdza jego skuteczną modyfikację. Uzyskano również dane dotyczące charakterystyki UV pełnego antygenu, co potwierdza skuteczność jego syntezy.
Przygotowanie i optymalizacja monoklonalnych przeciwciał
W procesie immunizacji myszy zastosowano różne dawki antygenu, co pozwoliło na uzyskanie przeciwciał o wysokiej czułości. Po przeprowadzeniu serii immunizacji, wyselekcjonowano komórki hybrydowe, które wykazały najlepsze wyniki w testach ELISA. Ustalono, że powinowactwo uzyskanych przeciwciał wynosi 9,85 × 109 L/mol, co świadczy o ich wysokiej efektywności.
Wyniki testów detekcji w rzeczywistych próbkach
Przeprowadzono testy na rzeczywistych próbkach mięsa (wieprzowina, drób, ryby), które wykazały wysoką skuteczność detekcji ofloksacyny. Wartości współczynnika odzysku dla wszystkich próbek mieściły się w zakresie 80%–120%, co potwierdza przydatność opracowanej metody w praktyce.
Dyskusja nad wynikami i ich znaczenie
Opracowana metoda immunochromatograficzna na złocie koloidalnym wykazuje wysoką czułość i specyfikę, co czyni ją odpowiednią do wykrywania pozostałości ofloksacyny w żywności pochodzenia zwierzęcego. W porównaniu do tradycyjnych metod detekcji, takich jak HPLC, nowa metoda jest znacznie prostsza i tańsza, co umożliwia jej zastosowanie w warunkach terenowych. Wysoka specyfika przeciwciał monoklonalnych pozwala na dokładną detekcję ofloksacyny, minimalizując ryzyko fałszywych wyników.
Podsumowanie i wnioski
Badania wykazały, że opracowana metoda detekcji ofloksacyny jest nie tylko skuteczna, ale także praktyczna w zastosowaniach terenowych. Wysoka czułość i specyfika nowej metody stanowią istotny krok w kierunku zapewnienia bezpieczeństwa żywności oraz ochrony zdrowia publicznego. W przyszłości warto kontynuować prace nad udoskonaleniem tej technologii, aby jeszcze bardziej zwiększyć jej zastosowanie w różnych dziedzinach przemysłu spożywczego.
Bibliografia
Li Xiaolan, Huang Jin, Li Na, Salah Mahmoud, Guan Shuoning, Pan Wenwen, Wang Ziyi, Zhou Xinghua and Wang Yun. Development of a Colloidal Gold Immunochromatographic Assay Strip Using a Monoclonal Antibody for the Rapid Detection of Ofloxacin. Foods 2024, 13(24), 125-132. DOI: https://doi.org/10.3390/foods13244137.
